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Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

別名：D-α-Hydroxyglutaric acid disodium

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate (D-α-Hydroxyglutaric acid disodium) is a competitive inhibitor of α-ketoglutarate-dependent dioxygenases with Ki of 0.628 mM.

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate化学構造

CAS No. 103404-90-6

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代表番号: 045-509-1970|電子メール：[email protected]
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生物活性

製品説明 Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate (D-α-Hydroxyglutaric acid disodium) is a competitive inhibitor of α-ketoglutarate-dependent dioxygenases with Ki of 0.628 mM.
Targets
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase [1]
In Vitro
In vitro In U-87MG cells, (R)-2-Hydroxyglutarate acts as weak antagonists of α-KG to inhibit α-KG-dependent histone demethylases and increases dimethylation on both H3K9 and H3K79. [1] Besides, (R)-2-Hydroxyglutarate inhibits ATP synthase and mTOR signaling, and thus causes growth arrest and tumor cell killing. [2]
Kinase Assay Enzymatic Assays
To assay human JHDM1A/KDM2A demethylase activity toward H3K36me2, His tagged JHDM1A is first obtained by transforming pET28a-JHDM1A into Escherichia coli BL21 and protein expression is induced by addition of 1 mM IPTG at 30° C when cell density reaches 0.5 OD600 units. Cells are lysed by sonication and Ni-NTA agarose is used to purify His-JHDM1A fusion proteins. Histone demethylase assay is carried out by incubating 2 μg oligonucleosomes, 4 μg purified His-JHDM1A, and/or 10–50 mM L- or D-2-HG in histone demethylation buffer [50 mM HEPES (pH 8.0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0.1–0.5 mM α-KG, 2 mM ascorbate] at 37° C for 2–3 hr and the reactions are stopped by the addition of SDS loading buffer and subsequently analyzed by western blotting using anti-H3K36me2 antibody. To measure CeKDM7A demethylase activity toward H3K9me2 and H3K27me2, two synthetic dimethylated peptides H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] and H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS] are used as substrates. Demethylase assays are carried out in the presence of 10 μg enzyme, 1 μg peptide in 20 μl buffer 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)22, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF for 3 hr. The demethylation reaction mixture is desalted by passing through a C18 ZipTip. To examine the inhibitory effect of 2-HG, various concentrations of 2-HG are incubated with KDM7A briefly before adding other reaction mixtures. The samples are analyzed by a MALDI-TOF/TOF mass spectrometer.
細胞実験 細胞株 U87/IDH1(R132H), Octyl α-KG- or octyl 2-HG-treated U87, and HCT 116 IDH1(R132H/+) cells
濃度 ~800 μM
反応時間 4 days
実験の流れ

Cells are seeded in 12-well plates and, after overnight incubation, treated with the indicated concentrations of each compound. After harvesting, cells are stained with acridine orange (AO) and 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Cell number and viability are measured based on AO and DAPI fluorescence as measured by NC3000 following the manufacturer’s instructions.

化学情報

分子量 192.08 化学式

C5H6Na2O5
CAS No. 103404-90-6 SDF Download Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate SDFをダウンロードする
Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]
保管

In vitro
Batch:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble ( 吸湿したDMSOは溶解度を減少させます。新しいDMSOをご使用ください。)

Ethanol : Insoluble

モル濃度計算器

in vivo
Batch:

Add solvents to the product individually and in order.

投与溶液組成計算機

実験計算

モル濃度計算器

質量 濃度 体積 分子量

投与溶液組成計算機(クリア溶液)

ステップ１：実験データを入力してください。（実験操作によるロスを考慮し、動物数を1匹分多くして計算・調製することを推奨します）

mg/kg g μL 匹

ステップ２：投与溶媒の組成を入力してください。（ロット毎に適した溶解組成が異なる場合があります。詳細については弊社までお問い合わせください）

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

計算結果：

投与溶媒濃度： mg/ml;

DMSOストック溶液調製方法： mg 試薬を μL DMSOに溶解する（濃度 mg/mL, 注：濃度が当該ロットのDMSO溶解度を超える場合はご連絡ください。 )

投与溶媒調製方法：Take μL DMSOストック溶液に μL PEG300，を加え、完全溶解後μL Tween 80，を加えて完全溶解させた後 μL ddH2O，を加え完全に溶解させます。

投与溶媒調製方法：μL DMSOストック溶液に μL Corn oil，を加え、完全溶解。

注意：１.ストック溶液に沈殿、混濁などがないことをご確認ください；
２.順番通りに溶剤を加えてください。次のステップに進む前に溶液に沈殿、混濁などがないことを確認してから加えてください。ボルテックス、ソニケーション、水浴加熱など物理的な方法で溶解を早めることは可能です。

技術サポート

ストックの作り方、阻害剤の保管方法、細胞実験や動物実験の際に注意すべき点など、製品を取扱う時に問い合わせが多かった質問に対しては取扱説明書でお答えしています。

Handling Instructions

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