H2DCFDA (DCFH-DA)

別名：2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate

製品コード：S9687 純度：99.93%

H2DCFDA (DCFH-DA) is a cell-permeable probe used to detect intracellular reactive oxygen species (ROS) production. It is de-esterified intracellularly and turns to highly fluorescent 2′,7′-dichlorofluorescein upon oxidation. It is used in sensitive and rapid quantitation of oxygen-reactive species in response to oxidative metabolism; microplate assay for detecting oxidative products in phagocytic cells, and quantitative multiwell myeloid differentiation assay.(Ex/Em=488/525 nm)

CAS No. 4091-99-0

サイズ	価格(税別)	在庫状況
10mM (1mL in DMSO)	JPY 29500	国内在庫あり
25mg	JPY 22000	国内在庫あり
100mg	JPY 44500	国内在庫あり
1g	JPY 133500	国内在庫なし(納期7~10日)

代表番号: 045-509-1970\|電子メール：sales@selleck.co.jp よく尋ねられる質問

文献中Selleckの製品使用例（9）

製品安全説明書

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99.93

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ROS阻害剤の選択性比較

阻害剤	Citation	FAAH	その他
URB597	7	++++
PF-3845	4	+
URB937	0	++
JNJ-42165279	1	++
PF-04457845	1	+++
JZL195	0	++++	MAGL
JNJ-1661010	0	+++
Biochanin A	5	+	EGFR
LY-2183240	0	✔	MGL

1. "+" indicates inhibitory effect. Increased inhibition is marked by a higher "+" designation. 2. "✔" indicates inhibitory effect, but without specific value.

生物活性

製品説明

Targets

ROS ^[1]

In Vitro
In vitro	1. H2DCFDA is dissolved in DMSO to obtain a 10 mM stock solutions and further diluted before use. 2. Cells are incubated with 5 μM H2DCFDA solution in PBS in the dark for 30 min at 37°C, then harvested with 0.05% trypsin-EDTA solution, suspended in a fresh medium, and immediately analyzed with flow cytometer. 3. Along with the H2DCFDA probe, if indicated, use ROS-insensitive modification of the fluorescein dye DCFDA as a positive control. The staining procedure is the same as for the H2DCFDA。 Emission (Em)=517 Excitation (Ex)=492 517
細胞実験	細胞株	hCECs
	濃度	10 μM
	反応時間	30 min
	実験の流れ	Intracellular ROS levels in hCECs are measured by incubating the cells with the redox-sensitive fluorescent dye 2'7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) (10 μM) at 37℃ for 30 minutes in the dark. The cells are then detached from the culture wells using 0.25% trypsin-EDTA and washed twice using ice-cold PBS. Flow cytometry measurements are performed three times for each treatment. Mean fluorescence intensity is quantified using software. Cells that had been incubated without DCFH-DA are used as negative control. The distribution of fluorescent dichlorofluorescein (DCF) on the cell monolayer is visualized and photographed using a fluorescence microscope.

参考
[1] Konrad A Szychowski, et al. Environ Sci Pollut Res Int. 2016 Jun;23(12):12246-52. [2] Jin Hyoung Park, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2018 Oct 1;59(12):5108-5115. [3] Szychowski KA, et al. Environ Sci Pollut Res Int. 2016 Jun;23(12):12246-52.

参考

化学情報

分子量	487.29	化学式	C₂₄H₁₆Cl₂O₇
CAS No.	4091-99-0	SDF	--
Smiles	CC(=O)OC1=CC2=C(C=C1Cl)C(C3=C(O2)C=C(OC(C)=O)C(=C3)Cl)C4=C(C=CC=C4)C(O)=O
保管	3 years -20°C(in the dark) powder	溶液の保管冷凍と解凍の繰り返しを避けるため小分けにしてください	1年-80°Cin solvent
保管	3 years -20°C(in the dark) powder	溶液の保管冷凍と解凍の繰り返しを避けるため小分けにしてください	１ケ月-20°Cin solvent

In vitro
Batch:

DMSO : 97 mg/mL ( (199.06 mM)；吸湿したDMSOは溶解度を減少させます。新しいDMSOをご使用ください。)

Ethanol : 7 mg/mL

Water : Insoluble

モル濃度計算器

in vivo
Batch:

Add solvents to the product individually and in order.

投与溶液組成計算機

Clear solution

5%DMSO 1 40%PEG300 Click to order 2 5%Tween 80 Click to order 3 50%ddH2O

4.85mg/ml (9.95mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 97 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

Clear solution

5% DMSO 1 95% Corn oil

0.8mg/ml (1.64mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 16 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

実験計算

モル濃度計算器

質量	濃度	体積	分子量
=	×	×

希釈計算器分子量計算器

投与溶液組成計算機(クリア溶液)

ステップ１：実験データを入力してください。（実験操作によるロスを考慮し、動物数を1匹分多くして計算・調製することを推奨します）

投与量 mg/kg 動物平均体重 g 投与体積（動物毎）μL 動物数匹

ステップ２：投与溶媒の組成を入力してください。（ロット毎に適した溶解組成が異なる場合があります。詳細については弊社までお問い合わせください）

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

計算結果：

投与溶媒濃度： mg/ml;

DMSOストック溶液調製方法： mg 試薬を μL DMSOに溶解する（濃度 mg/mL, 注：濃度が当該ロットのDMSO溶解度を超える場合はご連絡ください。 )

投与溶媒調製方法：Take μL DMSOストック溶液に μL PEG300，を加え、完全溶解後μL Tween 80，を加えて完全溶解させた後 μL ddH₂O，を加え完全に溶解させます。

投与溶媒調製方法：μL DMSOストック溶液に μL Corn oil，を加え、完全溶解。

注意：１.ストック溶液に沈殿、混濁などがないことをご確認ください；
２.順番通りに溶剤を加えてください。次のステップに進む前に溶液に沈殿、混濁などがないことを確認してから加えてください。ボルテックス、ソニケーション、水浴加熱など物理的な方法で溶解を早めることは可能です。

技術サポート

ストックの作り方、阻害剤の保管方法、細胞実験や動物実験の際に注意すべき点など、製品を取扱う時に問い合わせが多かった質問に対しては取扱説明書でお答えしています。

Handling Instructions

他に質問がある場合は、お気軽にお問い合わせください。

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C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
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C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
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C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):